ATCC BAA-1706 肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）产品简介
一、产品名称
二、产品特点
生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具高毒力碳青霉烯耐药双重感染风险且传播性强，区别于 KPC 型 hv-CRKP（如 ATCC BAA-1705），该菌株携带 OXA-48 碳青霉烯酶基因（全球范围内流行的主要碳青霉烯酶基因型之一，尤其在欧洲、中东及亚洲部分地区高发），同时携带 rmpA2、iucB 等高毒力基因，可通过医疗器械、环境表面及医务人员手卫生快速跨区域传播，引发医院集群性感染，病死率高达 55%-70%，尤其易感染老年患者、长期住院患者及免疫功能严重低下人群，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床 OXA-48 型 hv-CRKP 集群性感染患者的呼吸机管路样本，生物学特性与全球 OXA-48 型 hv-CRKP 流行株高度一致，其产 OXA-48 酶活性稳定、荚膜多糖分泌量高、铁载体获取能力突出，可模拟 “环境定植 - 器械污染 - 患者感染 - 跨区域传播” 的典型集群性感染过程，是研究 OXA-48 型 hv-CRKP 传播机制与致病路径的理想模型。
形态与培养特性：革兰氏阴性短杆菌，具 OXA-48 型 hv-CRKP 特有的厚荚膜形态与碳青霉烯耐药筛选适配性：
显微镜形态：菌体呈短杆状（0.6-1.1μm×1.8-2.5μm），大小与 ATCC BAA-1705 相近，单个、成对或短链排列（呈 “双球状” 聚集的比例高达 40%-50%，略低于 BAA-1705，适配其更强的环境分散传播特征），无芽孢，无鞭毛（动力试验 100% 阴性，与其他肺炎克雷伯菌一致），革兰氏染色呈均匀深红色（染色稳定性高，30-60 秒内不易脱色，适配呼吸机管路、环境拭子等复杂样本染色操作），荚膜染色可见极厚荚膜（荚膜厚度约 1.0-1.5μm，略薄于 BAA-1705，但荚膜多糖含 OXA-48 基因调控相关修饰，增强其环境耐受性与抗吞噬能力，是区别于 KPC 型 hv-CRKP 的结构特征）；
培养要求：兼性厌氧，耐受低浓度碳青霉烯类药物与干燥环境（适配环境表面长期存活与传播特征，在含亚胺培南 2μg/mL 的培养基上仍可生长，低于 BAA-1705 的筛选浓度），最适培养基为含亚胺培南的麦康凯琼脂（碳青霉烯耐药筛�。前放嗄吓ǘ� 2μg/mL）、血琼脂及营养肉汤（添加 0.05% 吐温 - 80 促进 OXA-48 酶分泌），最适温度 35-37℃（温度波动 ±1.5℃时，生长速率变化≤8%，适配不同地区医院实验室培养条件差异），生长速度中等（20-26 小时形成清晰菌落，略慢于 BAA-1705，适配其环境缓慢定植特征），核心特征为 **“耐药 - 高毒力 - 传播性” 三表型培养适配性（在含低浓度亚胺培南的麦康凯琼脂上形成黏液型菌落，既体现 OXA-48 型耐药特性，又保留高毒力株菌落特征，同时可在干燥环境表面存活 72 小时以上，区别于 KPC 型 hv-CRKP 的环境存活能力）**；
菌落形态：含药麦康凯琼脂上呈圆形、表面黏稠多黏液且边缘略规则的粉红色菌落（直径 1.5-2.2mm，与 BAA-1705 相近），质地柔软（因荚膜多糖与 OXA-48 酶共同分泌，挑取时拉丝长度可达 5-8cm，略短于 BAA-1705，是 OXA-48 型与 KPC 型 hv-CRKP 的肉眼鉴别点之一），菌落表面具中等光泽（因环境适应性外膜蛋白表达，光泽度高于 BAA-1705）；血琼脂上呈圆形、灰白色、无溶血现象的菌落，边缘整齐；在干燥环境拭子样本培养中，菌落形成时间延长至 24-30 小时，但黏液型特征与耐药性保持稳定；菌落易与 KPC 型 hv-CRKP 混淆，需通过耐药基因型检测、环境存活能力测试及生化细节差异进一步确认属性。
生化与药敏特性：生化反应具 OXA-48 型 hv-CRKP 特有标识，药敏谱符合其区域流行治疗需求：
生化特性：氧化酶阴性、触酶阳性（阳性反应时间稳定在 15-28 秒，略长于 BAA-1705，适配其酶分泌节律差异），发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖产酸产气（不发酵山梨醇，是区别于 BAA-1705 的核心生化鉴别点，BAA-1705 发酵山梨醇阳性），VP 试验强阳性（反应强度与 BAA-1705 相近），甲基红试验阴性，枸橼酸盐利用试验阳性（48 小时内 98% 阳性，偶见延迟阳性，适配其环境适应相关代谢调节），生化结果符合 OXA-48 型 hv-CRKP 鉴定标准，可作为 OXA-48 型菌株生化鉴定卡性能验证的关键菌株，尤其适合区分不同基因型 hv-CRKP；
药敏特性：核心优势在于OXA-48 型 hv-CRKP 专属药敏谱，对青霉素类（氨苄西林）、头孢菌素类（头孢噻肟、头孢他啶）、碳青霉烯类（亚胺培南、美罗培南）、氟喹诺酮类（左氧氟沙星）均耐药（亚胺培南 MIC 8-16μg/mL，美罗培南 MIC 8-16μg/mL，耐药浓度与 BAA-1705 相近，但对厄他培南耐药性更强，MIC 16-32μg/mL，区别于 BAA-1705 的厄他培南 MIC 8-16μg/mL），对氨基糖苷类（庆大霉素、阿米卡星）中度敏感（庆大霉素 MIC 4-8μg/mL，BAA-1705 对庆大霉素耐药），仅对多黏菌素类（黏菌素）、替加环素及新型 β- 内酰胺酶抑制剂复方制剂（美罗培南 / 法硼巴坦）敏感（黏菌素 MIC 0.5-2μg/mL，与 BAA-1705 相近），药敏谱与 OXA-48 型 hv-CRKP 高发地区的临床治疗需求高度匹配，同时其 OXA-48 基因与 rmpA2 基因表达存在协同调控，是研究 OXA-48 型 hv-CRKP “耐药 - 毒力 - 传播” 三重特性协同机制的理想模型。
三、储存环境
未开封状态：以冻干粉（真空包装，含 10^7-10^8 CFU / 支，添加荚膜保护剂、OXA-48 基因稳定剂与 rmpA2 基因稳定剂）或甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存（可保存 1 年，与 BAA-1705 一致），长期（>1 年）必须置于 - 80℃±2℃储存（OXA-48 基因对温度波动更敏感，需更严格温控，BAA-1705 允许 ±3℃波动），严禁反复冻融（冻融次数≥1 次时，活菌率下降≥55%，且 OXA-48 酶活性降低 45%、荚膜厚度变异系数升至 22% 以上，酶活性下降幅度大于 BAA-1705），保质期 3 年（与 BAA-1705 一致，因双重属性菌株表型稳定性均低于单一特性菌株）；
甘油菌：直接 - 80℃±2℃保存（不可在 - 20℃存放，否则会导致 OXA-48 基因质粒丢失，BAA-1705 主要为染色体整合耐药基因，质粒丢失风险较低），室温暴露 8 分钟致活力下降 50%（暴露耐受性低于 BAA-1705，因 OXA-48 型菌株对环境氧化应激更敏感），保质期 2 年，解冻后需一次性使用（不可分装，防止 OXA-48 基因通过质粒水平转移污染其他菌株，尤其避免与非 OXA-48 型菌株实验区域混用）。
复苏后状态：复苏菌液（营养肉汤，添加 0.05% 吐温 - 80 与 1μg/mL 亚胺培南，同步诱导 OXA-48 酶与高毒力表型恢复）2-8℃冷藏 4 天内使用（4 天内 OXA-48 酶活性、荚膜厚度与毒力基因表达量波动≤10%，超过则需重新复苏，与 BAA-1705 一致）；斜面培养物（含亚胺培南的麦康凯琼脂斜面，添加 0.05% 吐温 - 80）2-8℃冷藏 2 周内传代（传代间隔≥5 天时，双表型稳定性最佳，略长于 BAA-1705 的传代间隔），传代时需避免反复划线（防止 OXA-48 基因质粒丢失导致耐药表型退化，BAA-1705 无此风险），使用前需通过五项关键指标验证：①镜检确认极厚荚膜形态（厚度≥1.0μm）；②山梨醇发酵试验（阴性）；③亚胺培南药敏 MIC 值（8-16μg/mL）；④OXA-48 基因 PCR（阳性）；⑤rmpA2 基因 PCR（阳性），确保表型未漂移，符合 OXA-48 型 hv-CRKP 要求。
四、使用方法
复苏操作：严格遵循 OXA-48 型 hv-CRKP 复苏流程，生物安全柜内（全程维持 18-20℃低温环境，低于 BAA-1705 的 18-22℃，适配其对温度的敏感性），冻干粉加 1mL 含吐温 - 80 与亚胺培南的营养肉汤溶解，37℃±0.2℃恒温培养箱振荡培养（160rpm，低于 BAA-1705 的 180rpm，避免过度振荡导致质粒丢失）20-26 小时；待菌液 OD600 值稳定在 0.8-0.9（吸光度变异系数≤4%）、镜检见含极厚荚膜的短杆状菌体，且接种含药麦康凯琼脂形成黏液型拉丝菌落（拉丝长度≥5cm）时，通过碳青霉烯酶确证试验（改良 Hodge 试验阳性）与 OXA-48、rmpA2 基因 PCR 确认双重属性后使用（复苏成功率≥88%，略低于 BAA-1705，因 OXA-48 型菌株复苏条件更苛刻）。
传代培养：挑取含药麦康凯琼脂上的黏液型单菌落（选择菌落中心黏液最丰富、形态最典型的菌体，避免挑取边缘非黏液型菌落，此类菌落易丢失 OXA-48 质粒），划线接种新鲜含药麦康凯琼脂平板，37℃±0.2℃培养 20-26 小时；斜面保存后 2-8℃冷藏，传代≤3 代（与 BAA-1705 一致，传代次数≥4 代时，OXA-48 质粒丢失率升至 35% 以上，显著高于 BAA-1705 的耐药基因稳定性），每次传代后需进行 “形态 - 生化 - 耐药 - 毒力 - 基因型” 五重验证：①革兰氏染色与荚膜染色确认厚荚膜稳定性；②山梨醇发酵试验与 VP 试验确认生化一致性；③亚胺培南与庆大霉素药敏确认耐药谱稳定性；④rmpA2 基因 PCR 确认高毒力属性；⑤OXA-48 基因 PCR 确认耐药基因型，确保菌株始终符合 OXA-48 型 hv-CRKP 特征。
应用操作：
OXA-48 型 hv-CRKP 集群感染质控：用于医院检验科、疾控中心的集群性感染样本（呼吸机管路、环境拭子、患者血液）鉴定系统（质谱 OXA-48 型 hv-CRKP 专属数据库、OXA-48 基因快速检测试剂盒）的性能验证，确保 OXA-48 型 hv-CRKP 不被漏检或误判为其他基因型 hv-CRKP，尤其适配跨区域集群性感染的溯源与防控；
抗 OXA-48 型 hv-CRKP AST 校准：校准针对 OXA-48 型菌株的 AST 试剂（如美罗培南 / 法硼巴坦药敏纸片、低浓度亚胺培南筛选平板）的 MIC 值，制定 OXA-48 型 hv-CRKP 感染区域化用药方案（如在氨基糖苷类敏感地区，可联合使用黏菌素与阿米卡星，区别于 BAA-1705 的用药方案），同时可用于 AST 仪器对 OXA-48 型菌株耐药判读标准的优化；
传播机制研究：用于 OXA-48 型 hv-CRKP 环境存活机制（如外膜蛋白对干燥环境的耐受性）、质粒水平传播机制（如 OXA-48 基因质粒的转移频率与宿主范围）及 “耐药 - 毒力 - 传播” 三特性协同机制研究，为跨区域集群性感染防控提供理论依据，尤其适合高发地区的感染防控策略制定；
区域化诊断试剂验证：作为 OXA-48 型 hv-CRKP 高发地区诊断试剂（如胶体金 OXA-48 抗原试纸、荧光定量 PCR 试剂盒）的区域化标准品，校准试剂对当地流行株的检测敏感性与特异性，解决通用试剂在特定地区检出率低的问题，同时可用于不同地区 hv-CRKP 流行特征对比研究。
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