形态与生化:菌体呈短杆状,大小(0.5-1.0)μm×(1.0-3.0)μm,无芽孢,周生鞭毛(具较强运动性)。最适生长温度 37℃,适宜 pH 6.0-8.0,兼性厌氧(有氧环境生长更旺盛,无氧时可通过发酵葡萄糖产酸产气供能);生化特征与典型大肠杆菌一致:发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖均产酸产气,氧化酶阴性,触酶阳性,硝酸盐还原试验阳性,吲哚试验阳性,甲基红试验阳性,VP 试验阴性,不能利用柠檬酸盐作为唯一碳源,这些稳定生化反应是菌株鉴定的重要依据。
致病性相关:属于非致病菌株,自然定植于人和温血动物肠道,不携带肠毒素、志贺毒素等致病因子,无引发肠道或全身感染的能力;核心特点是对青霉素类药物(如青霉素 G)具有固有耐药性(因产青霉素酶),主要用于与敏感菌株(如 ATCC25922)的耐药性对比研究,及临床 AST 实验中耐药质控,确保耐药性检测结果的准确性。
培养:无需特殊气体环境,常规有氧培养即可。推荐培养基包括:营养琼脂(NA,用于菌株活化与纯培养)、麦康凯琼脂(MAC,发酵乳糖,菌落呈粉红色,直径 1.0-2.0mm,边缘光滑整齐)、伊红美蓝琼脂(EMB,菌落呈紫黑色,中心具金属光泽,便于快速鉴别)、MH 琼脂(AST 实验专用,需保证琼脂厚度 3-4mm)。37℃培养 16-24 小时后,营养琼脂上菌落呈乳白色、表面光滑;MH 琼脂上菌落呈圆形、半透明,直径 1.5-2.5mm,符合 AST 实验对菌落形态的要求。
保存:短期保存(1-4 周):将活化纯菌株接种营养琼脂斜面,37℃培养 12-16 小时后密封管口,4℃冰箱冷藏,每 2 周观察菌株活力,若出现污染或萎缩需重新活化;长期保存(1 年以上):采用 - 80℃甘油冷冻保存(20% 无菌甘油与对数期菌液 1:1 混合,分装冻存管,避免反复冻融),或冻干保存(10% 脱脂乳为保护剂,冻干后 - 20℃以下存放)。复苏时,将冻存菌液或冻干菌粉接入营养肉汤,37℃振荡培养 8-10 小时(转速 180-200rpm),待菌液 OD600 值达 0.5-0.7(对数生长期,活菌数约 10^8 CFU/mL)后,转接 MH 琼脂纯化,复苏后需通过 AST 验证耐药特性(如青霉素 G 抑菌圈直径符合耐药标准)。
应用:在临床检测领域,作为 AST 实验的耐药质控株,用于验证青霉素类等 β- 内酰胺类药物耐药性检测方法(纸片扩散法、肉汤稀释法)的有效性,校准耐药菌株的抑菌圈直径或最低抑菌浓度(MIC),确保临床耐药性检测结果可靠;在科研领域,用于抗菌药物耐药机制研究(如青霉素酶的表达与作用机制),及新型抗菌药物(针对产酶耐药菌)的体外活性评价;在食品与药品检测领域,作为培养基(MAC、EMB、MH 琼脂)性能验证的质控株,评估培养基对耐药大肠杆菌的促生长与选择性;在教学领域,用于演示细菌耐药性检测实验,帮助学习者理解耐药机制与 AST 实验的质控原理。
安全:常规操作可在生物安全一级(BSL-1)实验室进行(因无致病性);涉及大规模培养或可能产生气溶胶的操作(如离心、移液)时,需佩戴无菌手套、口罩,必要时戴护目镜,避免菌液接触破损皮肤或吸入气溶胶;实验后,污染耗材(培养皿、吸头、离心管)需 121℃高压灭菌 30 分钟,实验台面用含氯消毒剂(有效氯 1000mg/L)擦拭后,再用 75% 乙醇二次消毒;菌株储存需单独存放于专用冰箱,冻存管标注 “ATCC35218 大肠杆菌(青霉素耐药质控株)” 及保存日期,避免与致病性大肠杆菌混淆,防止交叉污染。


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