生物安全与来源:生物安全等级为 1 级(BSL-1),无致病性,属人类肠道正常菌群,常规超净台操作即可,对人员与环境无危害。菌株分离自健康人粪便,生物学特性与自然环境中粪源大肠杆菌高度一致,能精准模拟粪污染指示菌的代谢行为。
形态与培养特性:革兰氏阴性短杆菌,具典型肠道菌特征:
显微镜形态:菌体短杆状(0.5-1.0μm×1.0-2.0μm),单个或成对排列,无芽孢,具周生鞭毛(运动能力稳定),革兰氏染色呈均匀红色;
培养要求:兼性厌氧,对营养需求低,普通营养琼脂、麦康凯琼脂均可生长,最适温度 37℃,44.5℃可发酵乳糖(粪源菌标志),18-24 小时形成明显菌落;
菌落形态:TSA 平板上呈乳白色、光滑湿润菌落(直径 2-3mm);麦康凯琼脂上因发酵乳糖呈鲜艳粉红色;EMB 琼脂上具紫黑色金属光泽(核心鉴别特征)。
生化与生理特性:生化反应具 “教科书级” 稳定性:氧化酶阴性、触酶阳性,IMViC 试验结果 “++--”,发酵葡萄糖、乳糖产酸产气;对消毒剂敏感(含氯消毒剂 200mg/L 作用 30 秒杀灭率≥99.99%),是消毒效果验证的标准靶菌。
未开封状态:以冻干粉(真空包装,含 10^7-10^8 CFU / 支,含保护剂)或甘油菌悬液(20% 甘油,-80℃专用)供应:
冻干粉:-20℃以下冷冻保存,长期(>1 年)建议 - 80℃储存,严禁反复冻融,保质期 3 年;
甘油菌:直接 - 80℃保存,不可室温放置,保质期 2 年,解冻后一次性使用。
复苏后状态:复苏菌液(TSB 肉汤培养)2-8℃冷藏 5 天内使用;斜面培养物(TSA 斜面)2-8℃冷藏 2 周内传代,使用前镜检确认菌体形态正常。
复苏操作:超净台内,冻干粉加 1mL 无菌 TSB 肉汤溶解,37℃振荡培养 12-16 小时,菌液浑浊、镜检见典型短杆菌即可使用。
传代培养:挑取 TSA 平板单菌落,划线接种新鲜 TSA 平板,37℃培养 24 小时,斜面保存后 2-8℃冷藏,传代不超过 5 代。
应用操作:
质控检测:验证食品、水质中大肠菌群检测方法(如平板计数、快速试剂盒)准确性;
消毒测试:评估消毒剂杀菌效果,计算杀灭率;
教学校准:用于微生物实验教学,演示革兰氏染色、生化反应操作。


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