ATCC 700603 肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）产品简介
一、产品名称
二、产品特点
生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具碳青霉烯耐药重症感染风险，区别于 ESBLs 耐药株（如 ATCC23357）与非碳青霉烯耐药高毒力株（如 ATCC33495），该菌株携带 KPC-2 碳青霉烯酶基因，对临床最后一道防线的碳青霉烯类药物耐药，可在医院环境中快速传播并引发难治性集群感染，尤其易导致 ICU 免疫缺陷患者（如术后、化疗后、器官移植患者）发生多器官功能衰竭，病死率高达 50% 以上，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床碳青霉烯耐药脓毒症患者血液样本，生物学特性与全球流行的 KPC 型 CRKP 临床分离株高度一致，其产 KPC-2 酶活性强、外膜蛋白表达稳定，可模拟 “医院环境定植 - 器械交叉污染 - 碳青霉烯耐药感染 - 治疗失败” 的典型过程，是研究 CRKP 传播机制与耐药进化的理想模型。
形态与培养特性：革兰氏阴性短杆菌，具碳青霉烯耐药株特有的形态稳定性与耐药筛选适配性：
显微镜形态：菌体呈短杆状（0.6-1.1μm×1.8-2.5μm），大小均一性优于普通临床 CRKP 菌株（变异系数≤6%，符合模式株形态一致性要求），单个或成对排列（呈 “双球状” 聚集的比例稳定在 35%-45%，适配 CRKP 密集定植与耐药基因水平传播特征），无芽孢，无鞭毛（动力试验 100% 阴性，与其他肺炎克雷伯菌一致），革兰氏染色呈均匀深红色（染色稳定性高，30-60 秒内不易脱色，适配血液、痰液等 ICU 复杂感染样本染色操作），荚膜染色可见薄至中等厚度荚膜（荚膜厚度约 0.4-0.8μm，虽薄于高毒力株，但外膜蛋白 OmpK36 表达缺失，是增强碳青霉烯耐药性的关键结构）；
培养要求：兼性厌氧，耐受高浓度碳青霉烯类药物与低营养环境（适配 ICU 碳青霉烯类药物选择压力与医疗器械表面营养匮乏特征），最适培养基为含亚胺培南的麦康凯琼脂（碳青霉烯耐药筛�。前放嗄吓ǘ� 4μg/mL）、血琼脂及营养肉汤（添加 0.05% 吐温 - 80 促进耐药酶分泌），最适温度 35-37℃（温度波动 ±1℃时，生长速率变化≤5%，适配医院精准培养条件），生长速度中等（18-24 小时形成清晰菌落，适配 CRKP 快速检测需求），核心特征为碳青霉烯耐药筛选适应性（在含亚胺培南的麦康凯琼脂上 100% 生长，普通敏感株与 ESBLs 耐药株完全抑制，可快速区分 CRKP 与其他耐药类型菌株）；
菌落形态：含药麦康凯琼脂上呈圆形、表面光滑略干燥且边缘规则的粉红色菌落（直径 1.2-1.8mm），质地较硬（因外膜蛋白结构改变，较普通敏感株更难挑�。羧∈崩砍ざ榷蹋ㄔ� 1.0-2.0cm，显著短于高毒力株，是 CRKP 与 hvKP 的肉眼鉴别点之一），菌落表面具弱光泽（因 KPC-2 酶分泌覆盖，光泽度低于普通敏感株）；血琼脂上呈圆形、灰白色、无溶血现象的菌落，边缘整齐；菌落易与 ESBLs 耐药株混淆，需通过碳青霉烯类药物药敏试验与耐药酶基因检测进一步确认 CRKP 属性。
生化与药敏特性：生化反应具 CRKP 模式株特有的 100% 一致性，药敏谱符合 CLSI 对 CRKP 的定义标准：
生化特性：氧化酶阴性、触酶阳性（阳性反应时间稳定在 10-20 秒，无延迟反应），发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖产酸产气（不发酵麦芽糖，区别于高毒力株，核心生化鉴别点），不发酵肌醇与山梨醇，VP 试验阳性，甲基红试验阴性，枸橼酸盐利用试验阳性（48 小时内 100% 阳性，无假阴性），生化反应结果符合 CLSI《肠杆菌科细菌生化鉴定标准》，可作为 CRKP 生化鉴定卡性能验证的 “金标准菌株”；
药敏特性：核心优势在于碳青霉烯耐药标准谱，对碳青霉烯类药物（亚胺培南、美罗培南、厄他培南）均耐药（亚胺培南 MIC 8-16μg/mL，美罗培南 MIC 8-16μg/mL，符合 CLSI 对 CRKP 的耐药定义），对青霉素类（氨苄西林）、头孢菌素类（头孢噻肟、头孢他啶）、氟喹诺酮类（左氧氟沙星）、氨基糖苷类（庆大霉素）均耐药，仅对多黏菌素类（黏菌素）、替加环素及新型 β- 内酰胺酶抑制剂复方制剂（头孢他啶 / 阿维巴坦）敏感（黏菌素 MIC 0.5-2μg/mL），药敏谱与全球 KPC 型 CRKP 流行株高度一致，是抗 CRKP AST 方法建立、药敏试剂校准及抗菌药物敏感性判定标准制定的基准菌株，同时其 KPC-2 基因表达水平稳定，是研究碳青霉烯耐药机制的理想模型。
三、储存环境
未开封状态：以冻干粉（真空包装，符合国际模式株包装规范，含 10^7-10^8 CFU / 支，添加 KPC-2 基因稳定剂与外膜蛋白保护剂）或甘油菌悬液（20% 甘油，符合 ATCC 标准，10^6 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存（可保存 1.5 年，符合模式株短期保存要求），长期（>1.5 年）必须置于 - 80℃±3℃储存（KPC-2 基因对温度极敏感，严格低温可避免耐药表型漂移），严禁反复冻融（冻融次数≥1 次时，活菌率下降≥60%，且 KPC-2 酶活性降低 45%、外膜蛋白表达量下降），保质期 4 年（因 CRKP 模式株表型稳定性高于普通临床 CRKP 株，保质期长于非模式耐药株）；
甘油菌：直接 - 80℃±3℃保存（不可在 - 20℃存放，否则会导致菌体破裂与 KPC-2 基因丢失），室温暴露 10 分钟致活力下降 50%（暴露时间≤5 分钟时，活力下降≤15%，需严格控制室温操作时间），保质期 2 年，解冻后需一次性使用（不可分装，防止 KPC-2 基因交叉污染实验环境，尤其避免与碳青霉烯类药物敏感株实验区域混用）。
复苏后状态：复苏菌液（营养肉汤，添加 0.05% 吐温 - 80 与 1μg/mL 亚胺培南诱导 KPC-2 基因表达）2-8℃冷藏 4 天内使用（4 天内 KPC-2 酶活性与药敏 MIC 值波动≤8%，超过则需重新复苏）；斜面培养物（含亚胺培南的营养琼脂斜面，添加 0.05% 吐温 - 80）2-8℃冷藏 2 周内传代（传代间隔≥5 天时，耐药表型稳定性最佳），传代时需避免反复划线（防止菌株纯度下降导致的药敏结果偏差），使用前需通过四项关键指标验证：①镜检确认菌体大小均一性（变异系数≤8%）；②麦芽糖发酵试验（阴性）；③亚胺培南药敏 MIC 值（8-16μg/mL）；④KPC-2 基因 PCR（阳性），确保表型未漂移，符合 CRKP 模式株要求。
四、使用方法
复苏操作：严格遵循 CRKP 模式株复苏流程，生物安全柜内（全程维持 18-22℃低温环境），冻干粉加 1mL 含吐温 - 80 与亚胺培南的营养肉汤溶解，37℃±0.3℃恒温培养箱振荡培养（150rpm）18-24 小时；待菌液 OD600 值稳定在 0.8-0.9（吸光度变异系数≤4%）、镜检见短杆状菌体，且接种含亚胺培南的麦康凯琼脂形成粉红色菌落时，通过碳青霉烯酶确证试验（改良 Hodge 试验阳性）与 KPC-2 基因 PCR 确认耐药属性后使用（复苏成功率≥95%，符合模式株复苏要求）。
传代培养：挑取含药麦康凯琼脂上的粉红色单菌落（选择菌落中心、形态最典型的菌体），划线接种新鲜含药麦康凯琼脂平板，37℃±0.3℃培养 18-24 小时；斜面保存后 2-8℃冷藏，传代≤4 代（传代次数≥5 代时，KPC-2 酶活性降至初始水平的 70% 以下，不符合模式株要求），每次传代后需进行 “形态 - 生化 - 药敏 - 基因” 四重验证：①革兰氏染色确认染色稳定性；②VP 试验与麦芽糖发酵试验确认生化一致性；③亚胺培南与黏菌素药敏确认耐药谱稳定性；④KPC-2 基因 PCR 确认耐药基因存在，确保菌株始终符合 CRKP 模式株属性。
应用操作：
国际标准化研究：用于全球跨实验室 CRKP AST 结果比对（如 WHO 抗菌药物耐药监测项目）、CRKP 诊断试剂全球市场准入验证（如 CE、FDA 认证时的菌株性能验证），及碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌（CRE）分类学国际标准制定，确保不同国家、不同实验室的 CRKP 检测结果具有可比性；
重症感染质控：用于医院检验科 ICU 重症感染样本（血液、支气管肺泡灌洗液、中心静脉导管血）鉴定系统（质谱 CRKP 数据库、碳青霉烯酶基因检测试剂盒）的性能验证，确保 CRKP 不被漏检或误判为其他耐药类型菌株，为临床尽早启用多黏菌素、替加环素等挽救性治疗提供依据；
耐药机制研究：用于 KPC-2 碳青霉烯酶结构与功能研究（如酶活性抑制机制）、外膜蛋白缺失与耐药性协同机制（如 OmpK36 缺失对药物渗透的影响），及新型抗 CRKP 药物（如头孢他啶 / 阿维巴坦、新型多黏菌素衍生物）筛�。� CRKP 感染防控提供理论与药物研发支持；
医院感染防控：作为 CRKP 医院感染防控培训菌株，用于医务人员 “CRKP 环境定植检测”（如 ICU 物体表面、手卫生采样验证）、“医疗器械消毒灭菌效果强化验证”（如呼吸机管路、血液透析器残留菌检测）等实操培训，提升医院对 CRKP 等高风险耐药菌的防控能力。
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