形态与生化:菌体呈短杆状,大小(0.5-0.8)μm×(1.0-3.0)μm,无芽孢,周生鞭毛(具运动性)。最适生长温度 30-37℃,耐受温度范围 5-45℃(耐低温特性显著,可在奶粉中存活),适宜 pH 5.5-9.0,兼性厌氧(有氧环境生长更旺盛);生化特征独特:发酵葡萄糖、蔗糖产酸产气,不发酵乳糖、山梨醇,氧化酶阴性,触酶阳性,硝酸盐还原试验阳性,吲哚试验阴性,VP 试验阳性,能利用柠檬酸盐作为唯一碳源(与大肠杆菌等肠道菌的核心鉴别点),这些稳定生化反应是坂崎肠杆菌鉴定的关键依据。
致病性相关:属于条件致病菌,对婴幼儿(尤其早产儿、低体重儿)致病性强,可通过污染的婴幼儿配方奶粉等食品感染,引发败血症、脑膜炎、坏死性小肠结肠炎等严重疾病,致死率较高;对健康成人致病性较弱,多引起轻微肠道不适。ATCC 51329 毒力特性明确,主要用于婴幼儿食品中坂崎肠杆菌污染检测的阳性对照,及致病机制(如黏附侵袭宿主细胞)研究的模式株。
培养:无需特殊气体环境,常规有氧培养即可。推荐培养基包括:胰蛋白胨大豆琼脂(TSA,用于菌株活化与纯培养,菌落呈乳白色、表面光滑,直径 1.0-2.0mm,质地柔软)、坂崎肠杆菌选择性培养基(如 VRBA-MUG 琼脂,菌落呈粉红色,周围有红色晕圈,且在紫外灯下无荧光,与其他肠杆菌区分)、TSB 肉汤(用于增菌,37℃振荡培养 18-24 小时菌液浑浊度达 OD600=0.6-0.8)。37℃培养 24-48 小时后,选择性培养基上形成典型菌落,便于快速鉴别与纯化。
保存:短期保存(1-2 周):将活化纯菌株接种至 TSA 斜面,37℃培养 16-20 小时后密封管口,4℃冰箱冷藏,每 1 周观察 1 次(因菌株易在低温下活力下降,需缩短观察周期),出现菌落萎缩或污染需立即重新活化;长期保存(1 年以上):采用 - 80℃甘油冷冻保存(20% 无菌甘油与对数期菌液 1:1 混合,分装冻存管,避免反复冻融),或冻干保存(以 10% 脱脂乳为保护剂,冻干后 - 20℃以下干燥存放)。复苏时,将冻存菌液或冻干菌粉接入 TSB 肉汤,37℃振荡培养 18-24 小时,待菌液浑浊后转接选择性培养基纯化,复苏后需通过生化反应与分子鉴定(如 16S rRNA 测序)验证,确保菌株特性未改变。
应用:在食品检测领域,作为婴幼儿配方奶粉、谷物制品等食品中坂崎肠杆菌检测的质控株,验证检测方法(如增菌培养 - 分离纯化 - 生化鉴定流程)的准确性,评估 VRBA-MUG 等选择性培养基的选择性与促生长能力;在科研领域,用于坂崎肠杆菌致病机制研究(如毒力基因表达、宿主细胞相互作用),及新型检测技术(如快速核酸检测试剂盒)的性能验证;在食品工业领域,作为奶粉生产企业质量控制的参考株,优化生产过程中的杀菌工艺,降低污染风险;在教学领域,用于食品微生物学实验,演示致病菌检测流程与鉴别方法,强化食品安全防控意识。
安全:需在生物安全二级(BSL-2)实验室操作(因对婴幼儿致病性强);涉及菌液移液、离心、平板涂布等可能产生气溶胶的操作,需在生物安全柜内进行,操作人员需佩戴无菌手套、口罩、护目镜,避免皮肤接触菌液或吸入气溶胶;实验后,所有污染耗材(培养皿、吸头、离心管、接种环)需 121℃高压灭菌 30 分钟以上(确保彻底杀灭菌株),实验台面用含氯消毒剂(有效氯 2000mg/L)擦拭消毒,再用 75% 乙醇二次消毒;菌株储存需单独存放于专用 BSL-2 实验室冰箱,冻存管清晰标注 “ATCC 51329 坂崎肠杆菌(WDCM 00213)- 致病菌”、保存日期及操作人员,严禁与食品加工区域或非致病菌混合存放,防止实验室感染与环境污染。


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