菌体活化：取冻干菌粉，加入 1-2mL 无菌沙氏葡萄糖肉汤（SDB），涡旋振荡 1 分钟（避免剧烈振荡导致菌体破裂），制成菌悬液；将菌悬液转移至装有 10mL SDB 的锥形瓶中，30℃静态培养 18-24 小时，此时菌体以芽生孢子为主，浓度可达 10?-10? CFU/mL。
形态诱导与纯化：取上述菌液 0.1mL，涂布于沙氏葡萄糖琼脂（SDA）平板，30℃培养 48 小时，挑取单个乳白色黏稠菌落，转接至玉米粉吐温琼脂平板，30℃培养 72 小时，诱导假菌丝与厚垣孢子形成（显微镜观察确认形态特征）；再挑取纯化后的菌落接种至 SDB，30℃培养 24 小时，制成均一的种子菌悬液。
高浓度菌悬液制备：将种子菌悬液按 1:10 比例接种至新鲜 SDB，30℃静态培养 36 小时，通过离心（3000rpm，10 分钟）收集菌体，用无菌生理盐水重悬，调整浓度至 10?-10? CFU/mL（可通过血球计数板或麦氏比浊法校准），用于后续实验。
浓度校准：采用 “涂布计数法 + 麦氏比浊法” 双重验证。取 1mL 菌悬液，用无菌生理盐水 10 倍梯度稀释至 10??、10??，取 0.1mL 涂布 SDA 平板（每个稀释度 3 个平行），30℃培养 48 小时计数，计算平均菌落数与实际浓度，误差需控制在 ±0.2 log 内；同时，将菌悬液与 0.5 麦氏比浊标准管对比，确保浓度符合实验需求（0.5 麦氏比浊对应菌浓度约 10? CFU/mL）。若误差超范围，需排查稀释吸管污染、培养温度波动或离心转速不当等问题。
形态与生化鉴别：
显微镜观察：取 SDA 平板上的菌体，用 0.1% 乳酸酚棉蓝染色，光学显微镜（400 倍）下可见卵圆形芽生孢子（直径 3-5μm），部分菌体形成分支状假菌丝（无横隔）；玉米粉吐温琼脂培养后，可见顶端厚垣孢子（圆形，直径 8-10μm），这是白色念珠菌与其他念珠菌（如热带念珠菌无厚垣孢子）的核心鉴别特征。
生化特性：能发酵葡萄糖、麦芽糖产酸产气，发酵蔗糖产酸不产气，不发酵乳糖；同化葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，不同化乳糖；尿素酶试验阴性，触酶阳性，可进一步确认菌株身份。
个人防护：人员需穿全包裹式防护服、戴 N95 口罩（防止吸入菌雾）及护目镜（避免菌体接触眼睛黏膜），操作前后用 75% 乙醇消毒手部与防护服表面；若手部有伤口，需额外佩戴双层手套。
环境消毒：实验结束后，用 0.5% 过氧乙酸喷雾消毒生物安全柜内部（重点清洁气流格栅、操作台面及侧壁），作用 20 分钟后用无菌水擦拭，再开启紫外灯照射 30 分钟（紫外线波长 254nm，可有效杀灭残留酵母菌）；实验室地面、墙面每周用 0.2% 含氯消毒剂擦拭 1 次，防止菌体扩散。
废弃物处理：含菌培养物（如 SDA 菌落、菌悬液）需 121℃高压灭菌 30 分钟（确保彻底杀灭菌体与假菌丝）；含菌废液需先加入等量 10% 次氯酸钠溶液，室温静置 60 分钟（破坏菌体细胞膜）后再灭菌；实验耗材（如培养皿、吸头）需装入耐高温灭菌袋，灭菌后按医疗有害废弃物处理，不可与普通垃圾混放。
冻干保存法（推荐）：将对数期菌悬液（浓度 10? CFU/mL）与保护剂（10% 脱脂乳 + 5% 蔗糖）按 1:1 混合，分装至冻干管（每管 0.5mL），经冷冻干燥机处理后密封，4℃冷藏存放，保质期可达 5 年，菌体存活率≥90%。该方法能最大限度保留菌体的双形态转换能力与药敏特性，适合长期批量存储。
-80℃冷冻保存法：取对数期菌悬液，与 50% 无菌甘油按 1:1 混合（甘油终浓度 25%，防止冷冻过程中形成冰晶损伤菌体），分装为 1mL / 支的冻存管，快速放入 - 80℃冰箱（避免缓慢冷冻导致菌体破裂），冻存次数不超过 3 次（反复冻融会使菌体存活率降至 60% 以下），保质期 3-4 年。
短期保存法（1-2 个月）：将纯化后的菌落接种至 SDA 斜面，30℃培养 48 小时后，用无菌石蜡油覆盖斜面（厚度 1-2mm，隔绝空气），4℃冷藏存放，适合短期频繁使用的场景，但需每周观察菌体生长状态，避免污染。
存储管理：需单独存放于双锁生物安全冰箱的真菌专属区域，与细菌（尤其是芽孢杆菌）严格分区（防止交叉污染），标签需注明 “白色念珠菌（ATCC10231，WDCM 00054）”“非产毒”“存储日期”“浓度”，实行双人双锁领用制度；领用记录需详细注明用途（如 “抗真菌药敏测试”“食品防腐验证”），确保菌株不被滥用，严防泄漏引发实验室感染或环境污染。
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